总是被忽视的sgRNA，才是CRISPR基因编辑实验成功的关键！

CRISPR/Cas9的应用

1、 药物靶点的确定与验证

2、 基因环路上下游调控机制分析

3、 代谢通路调节机制分析

4、 LncRNA作用机制分析

图2：An overview of CRISPR/Cas9 mediated genome editing [3]

CRISPR/Cas9 系统成功的关键包括

1）如何减少和避免脱靶：采用nick形式的Cas9加双链sgRNA

2）sgRNA靶点的选择：Cas9 Nuclease切割位置在待修饰位点的30bp以内，Z差保持在50bp以内。

3）sgRNA品质：sgRNA活性是影响KI的关键因素之一，因此需要提前验证其活性。

4）Cas9 Nuclease形式的选择：缩短Cas9蛋白在细胞内的存续时间，可以避免连续切割和脱靶，建议使用mRNA或蛋白形式的Cas9。若采用质粒，需要确保其纯度和浓度（建议大于1μg/μl）。

……

翊圣生物经过匠心研发， 开发出的sgRNA体外合成试剂盒利用其提供的试剂和使用者自己设计的特异性DNA序列，可在单管反应 4小时内获得20-100μg具有功能的高品质的sgRNA，具有 合成效率高、品质好、切除效率高等特点。

Hifair ® Precision sgRNA Synthesis Kit测试数据

较高浓度的sgRNA关系到CRISPR/Cas9系统的编辑效果成败，因此只有加入高浓度的sgRNA方能对基因的编辑起较好效果。翊圣开发出的sgRNA体外合成试剂盒利用其提供的试剂和使用者自己设计的特异性DNA序列， 可在单管反应4小时内获得20-100μg，完全满足基因编辑的需要。

图3：不同时间的sgRNA的合成量

对于 sgRNA Synthesis Kit不仅要满足产量上的要求，还需要针对不同种类的sgRNA合成也要达到相当高的产量，方能满足不同类型基因的编辑需要，扩大试剂盒的应用范围。翊圣sgRNA Synthesis Kit经过多个种类的sgRNA的合成，其产量也是很高，可以满足实验所需，因此可以适应多种基因的编辑需要。

图4：不同种类的sgRNA的合成量

在影响CRISPR/Cas9系统的编辑的效果成败的关键因素中，合成的sgRNA的品质也是关键一环。因为合成的sgRNA的纯度（即品质）不好，对编辑的效率会产生很大影响。翊圣sgRNA Synthesis Kit所合成的sgRNA经过安捷伦2100测定，其条带明显、单一， 纯度高，说明品质较高，对后续的编辑效率会有很大提升。

图5：合成的sgRNA的品质（安捷伦2100测定）

最后，所合成的高品质sgRNA是否有活性，需要实地测定才能发现其是否有活性，是否能够与Cas9 Nuclease进行组合达到编辑基因的目的。翊圣sgRNA Synthesis Kit所合成的sgRNA与Cas9 Nuclease进行组合体外切割靶DNA，经琼脂糖凝胶电泳检测发现所合成的sgRNA可以有效引导Cas9 Nuclease在特定位点切割并产生特定大小的DNA片段，因此具备活性。

图6：sgRNA的剪切效率效果图

翊圣生物提供您高品质、高性价比的sgRNA合成试剂盒，让您的CRISPR/Cas9科学研究及相关基因编辑应用如虎添翼，共同为人类的未来健康奉献一份力量。

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【1】王晗月,杨晓菲,胡巢凤,李富荣. CRISPR/Cas9基因编辑技术在糖尿病细胞治疗中的应用研究进展[J]. 生命科学,2019,07:723-73.

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